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多能干細胞基因組編輯技術服務

Cas9慢病毒顆粒

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多能干細胞基因組編輯技術服務:

基因組編輯技術結合人多能干細胞以及成體干細胞生物學,提供了一個獨特的實驗平臺體系,可用于建立“個性化”疾病模型供遺傳突變分析和大規模藥物篩選。目前,常用的基因組編輯技術主要包括鋅指核酸酶(ZFN)、類轉錄激活因子效應物核酸酶(TALEN)和成簇規律間隔短回文重復序列系統(CRISPR/Cas9)。相比ZFN和TALEN,CRISPR/Cas9技術由于載體構建簡單、靶向位點選擇靈活、靶向效率更高,被廣泛用于各類細胞和模式動物的基因組編輯。在模擬人類疾病方面,人多能干細胞和成體干細胞由于自身干細胞特性具有一些明顯優勢:(1)擁有人類 基因組,結合基因組編輯技術,可用于精確模擬人類疾病遺傳背景;(2)具有多能性,在外界合適的誘導條件下,可以定向分化為各種體細胞類型和類器官小體(Organoids),并且一定程度上體外分化過程能反應體內正常發育過程,可用于觀察疾病發生的中間狀態;(3)具有無限增殖和自我更新能力,同時區別于各種轉化細胞系,具有正常核型,提供了大量更符合生理狀態的細胞用于研究和藥物篩選?!皞€性化”疾病模型的建立有助于深入解析不同遺傳突變的致病機制和開發高針對性的精準醫療方案。

CRISPR/Cas9系統對基因組編輯的實現依賴于利用Cas9在靶序列處進行定點切割,產生DNA雙鏈斷裂(Double strand breaks,DSBs),之后會通過兩種不同的機制進行修復。在沒有同源DNA作為模板時,會依賴非同源末端連接(NHEJ)的方式進行修復。這種修復機制是一種易于出錯的修復方式,也就是會在切口處造成堿基的隨機插入或者缺失,有時會造成靶位點基因的敲除或者移碼突變,從而使靶基因無法正常表達。如果存在同源的供體DNA序列作為模板,則細胞中會同時發生另一種更為精確的修復方式,即同源重組(HDR)。
    本技術服務適用于多能干細胞/各種永生化細胞系,可選擇NHEJ或者HDR介導的基因敲除、基因敲進、基因標記。我們優化了CRISPR/Cas9系統的編輯效率。如下圖所示:

 

 

下圖所示為原位敲進GFP報告基因的案例設計:

 

 

服務編號:ST-CC-001


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